電泳分析常用方法

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電泳分析常用方法

（一）醋酸纖維素薄膜電泳

醋酸纖維素是提纖維素的羥基乙酰化形成的纖維素醋酸酯。由該物質(zhì)制成的薄膜稱為醋酸纖維素薄膜。這種薄膜對(duì)蛋白質(zhì)樣品吸附性小，幾乎能完全消除紙電泳中出現(xiàn)的“拖尾”現(xiàn)象，又因?yàn)槟さ挠H水性比較小，它所容納的緩沖液也少，電泳時(shí)電流的大部分由樣品傳導(dǎo)，所以分離速度快，電泳時(shí)間短，樣品用量少，5μg 的蛋白質(zhì)可得到滿意的分離效果。因此特別適合于病理情況下微量異常蛋白的檢測(cè)。

醋酸纖維素膜經(jīng)過(guò)冰醋酸乙醇溶液或其它透明液處理后可使膜透明化有利于對(duì)電泳圖譜的光吸收掃描測(cè)定和膜的長(zhǎng)期保存。

⒈材料與試劑 醋酸纖維素膜一般使用市售商品，常用的電泳緩沖液為pH8.6 的***緩沖液，濃度在0.05-0.09mol/L。

⒉操作要點(diǎn)

⑴膜的預(yù)處理：必須于電泳前將膜片浸泡于緩沖液，浸透后，取出膜片并用濾紙吸去多余的緩沖液，不可吸得過(guò)干。

⑵加樣：樣品用量依樣品濃度、本身性質(zhì)、染色方法及檢測(cè)方法等因素決定。對(duì)血清蛋白質(zhì)的常規(guī)電泳分析，每 cm加樣線不超過(guò)1μl，相當(dāng)于60-80μg的蛋白質(zhì)。

⑶電泳：可在室溫下進(jìn)行。電壓為25V/cm，電流為0

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